电化学发光反应的步骤
点击次数：2773 更新时间：2023-05-24
电化学发光反应：电化学发光（electro－chemiluminescence，ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA+*，后者很不稳定，自发地失去一个质子（H+），形成自由基TPA*，这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy)3]2+*，能量来源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的 [Ru(bpy)3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+，同时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号得以增强。
电化学发光反应的步骤：
（1）将试管内两步反应结束的反应液输入流动池，由于磁铁吸引，磁性微粒被吸着在电极上，其余反应物流出流动池，完成游离的和结合的标记抗体的分离。
（2）将TPA溶液送入流动池，将残余的游离标记抗体排出流动池，在流动池中充满TPA溶液。
（3）撤下磁铁，电极上通电，三联吡啶钌与TPA发生电化学发光反应，发出的光被光电倍增管收集，测定光强度。
（4）通过换算得出待测标本中的抗原浓度。
（5）在流动池中送入清洗液，将反应物冲洗，即可测定下一个标本。
